问题:
说明对不同细胞进行分离所用方法的基本原理。[仔细阅读以上试题,并作答]
答案:
对不同细胞进行分离的技术有:离心、流式细胞术、显微切割和免疫磁珠技术。 离心分离技术分为速度沉降和等密度沉降。速度沉降分离法主要是根据细胞大小分离细胞。它所采用的介质最大密度应该小于被分离细胞的最小密度。细胞在单位重力作用下通过密度介质,或者在低离心力作用下通过梯度密度溶液(如蔗糖等)沉降。细胞大小不同,它们的沉降速度也不同,细胞越大沉降越快。适用于分离大小差异比较明显的细胞。等密度沉降分离法是根据细胞密度差异来分离细胞的。细胞在连续密度梯度的分离介质中经强离心力和足够长的时间,最后沉降或漂浮到与其密度相等的介质层面,并停留在那里不再移动,形成沉降带,各沉降带分别收集,从而将不同密度的细胞分离。在非连续密度梯度中,被分离的细胞主要停留在介于其自身密度上下的两种密度介质交界面上。 流式细胞仪的工作原理是:先用荧光染料偶联的抗体标记待分离的细胞,然后将细胞放入样本管中,细胞在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由喷嘴喷出,形成极细的微滴,每微滴至多含一个细胞。经激光照射,微滴中的细胞被激光激发产生荧光。仪器中的一系列光学系统收集信号,计算机系统进行收集、储存、分析并显示被测定的各种信号,对各种指标进行统计学分析。随后带有不同电荷的微滴向下落入偏转板高压静电场,按照所带的电荷分别向两极偏转,落入指定收集器中,达到对不同细胞分类收集的目的。激光捕获显微切割技术可从组织切片中精确地获得目标细胞。其方法是:首先制备常规组织切片,并覆以特制透明薄塑膜,在计算机控制下,并在正置显微镜观察下,用激光束沿着目标的边缘切割,覆膜按照激光束的行走轨迹被熔化,并与其下面的细胞紧密相连,然后再用另一束激光将切下的细胞团弹射入一容器中。 免疫磁珠技术是近年来国内外研究比较热门的一种新的细胞分选技术。磁珠是人工合成的一种微球颗粒,内含Fe2O3或Fe3O4,可被磁场所吸引,外含功能基团,可结合蛋白质。将活性蛋白质(如抗体)包被在磁珠上,与细胞表面特异性抗原结合,生成的磁珠-抗体-抗原复合物在外加磁场的作用下,与其他细胞分离。